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        1. 首頁 > 文章詳細

          薄層色譜法標準操作規程

          發布日期:2017-08-02 16:14:55 【關閉】
          摘要:薄層色譜法標準操作規程
          1、簡述:薄層色譜法,是將適宜的固定相涂布于玻璃板上,成一均勻薄層。等點樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別,雜質檢查或含量測定的方法。
          2、儀器與材料:
          2.1 玻板:除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑,平整、洗凈后的不附水珠,晾干。
          2.2 固定相或載體:最常用的有硅膠G、硅膠GF、硅膠H、硅膠HF254,其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、微晶纖維素F254等。其顆粒大小,一般要求直徑為10-40μm。薄層涂布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者系將固定相直接涂布于玻璃板上,后者系在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10-15%煅石膏(CaSO4·2H2O在140℃烘4小時),混勻后加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5-0.7%)適量調成糊狀,均勻涂布于玻璃板上。也有含一定展開液或緩沖液的薄層。
          2.3 涂布器:應能使固定相或載體在玻璃板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。
          2.4 點樣器:常用具支架的微量注射器或定時毛細管,應能使點樣位置正確集中。
          2.5 展開室:應使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴密蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便于觀察。
          3、操作方法:
          3.1 薄層板制備:除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表面的泡后,倒入涂布器中,在玻璃板上平穩地移動涂布器進行涂布(厚度為0.2-0.3mm),取下涂好薄層的玻璃板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘。即置有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
          3.2 點樣:除另有規定外,用點樣器點樣于薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,點樣直徑為2-4mm,點間距離約為1.5-2.0cm,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
          3.3 展開:展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,并在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使系統平衡或按正文規定操作。將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5-1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,等展開至規定距離(一般為10-15cm),取出薄層板,晾干,按各品種項下的規定檢測,如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度范圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,只有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。
          4、注意事項:
          4.1 所用玻璃板應洗凈不掛水珠,光滑平整。
          4.2 鋪板要均勻,厚度適宜,并于室溫下晾干后在110℃活化30分鐘,置于有干燥劑的干燥箱或干燥器中備用。
          4.3 點樣點一般為圓點,不能太大。
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